第十单元　第57课时　微生物的培养技术与应用

第57课时微生物的培育技术与应用

课标要求

1.通过配制培育基、灭菌、接种和培育等试验操作获得纯化的酵母菌菌落。2.分别土壤中分解尿素的细菌，并进行计数。

考情分析

1.微生物的基本培育技术

2023·全国乙·T37

2022·天津·T32021·天

津·T1

2.微生物的选择培育和计数

2023·山东·T152023·广东·T102023·北京·T162022·全国甲·T37

2022·全国乙·T372022·广东·T212021·江苏·T18

考点一微生物的基本培育技术

1．培育基的配制

(1)培育基的概念、用途和类型

①概念：人们依据微生物对养分物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的养分基质。

②用途：用以培育、分别、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。

③培育基的种类(按物理性质分)

培育基种类

培育基特点

作用

固体培育基

加凝固剂，如琼脂

微生物的分别与鉴定，活菌计数，保藏菌种

半固体培育基

容器放倒不致流出，猛烈震惊则破散

观看微生物的运动、分类鉴定

液体培育基

不加凝固剂

常用于工业生产、微生物的扩大培育

(2)培育基的配方

①主要养分物质：水、碳源、氮源、无机盐。

②其他条件：pH、特殊养分物质和氧气。如表：

微生物

乳酸杆菌

霉菌

细菌

厌氧微生物

特殊需求

添加维生素

一般pH调至酸性

一般pH调至中性或弱碱性

无氧

2.无菌技术

(1)目的：获得纯洁的微生物培育物。

(2)关键：防止杂菌污染。

(3)消毒与灭菌的比较

项目

消毒

灭菌

作用强度

较为温存的理化因素

猛烈的理化因素

作用程度

杀死物体表面或内部一部分微生物

杀死物体内外全部的微生物

芽孢和孢子

一般不能杀灭

能杀灭

适用对象

试验操作的空间、操作者的衣着和双手

微生物培育的器皿、接种用具和培育基等

常用方法

煮沸消毒法、巴氏消毒法等

湿热灭菌法、干热灭菌法、灼烧灭菌法等

(4)留意事项

①试验操作时，应避开已经灭菌处理的材料用具与四周的物品接触。

②为避开四周环境中微生物的污染，试验操作应在超净工作台上并在酒精灯火焰四周进行。

3．微生物的纯培育概念辨析

4．纯培育的过程(以酵母菌为例)：包括配制培育基、灭菌、接种、分别和培育等步骤。

(1)制备培育基

倒平板留意事项：a.温度：50℃左右；b.操作：在酒精灯火焰四周；c.冷凝后平板倒置。

提示平板冷凝后，皿盖上会分散水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培育基，又可以避开培育基中的水分过快挥发。

(2)接种和分别酵母菌

①平板划线法的原理：通过接种环在固体培育基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培育基的表面。经数次划线后培育，可以分别得到单菌落。

②平板划线法的操作步骤

(3)培育酵母菌

将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培育箱中培育24～48h。

推断正误

(1)培育基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质(√)

(2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培育基溅到皿盖上(×)

提示倒平板时，用拇指和食指将培育皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将锥形瓶中的培育基(10～20mL)倒入培育皿，马上盖上培育皿的皿盖，不能打开皿盖。

(3)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落(×)

提示接种环灼烧灭菌后，应冷却后再挑取菌落，以免高温杀死菌种。

(4)对试验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和灭菌(×)

提示对试验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。

发酵生产啤酒的过程中，杂菌产生的微量副产物是啤酒“上头”的缘由之一，可接受平板划线法对酵母菌进行纯化。如图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题：

(1)用图中字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤：d→b→f→a→e→c→h→g。

(2)在划线操作结束时，仍旧需要灼烧接种环吗？为什么？

提示需要；划线结束后灼烧接种环，能准时杀死接种环上残留的菌种，避开污染环境和感染操作者。

(3)在其次次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开头划线？

提示划线后，线条末端菌种的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开头，能使菌种的数目随着划线次数的增加而逐步削减，最终能得到由单个微生物繁殖而来的菌落。

(4)接种结束后，为什么要将一个未接种的培育基和一个已接种的培育基放在一起培育，未接种的培育基表面假如有菌落生长，说明白什么？

提示培育未接种的培育基的作用是对比，未接种的培育基经过培育后无菌落生长，说明培育基的制备是成功的；若有菌落生长，说明培育基灭菌不彻底，或培育基被污染了，需要重新制备。

考向一微生物的基本培育技术

1．(2022·湖北，4)灭菌、消毒、无菌操作是生物学试验中常见的操作。下列叙

免费下载链接
飞猫云链接地址：https://jmj.cc/s/crg9ec

压缩包解压密码：res.99hah.com_bFF3uSkgJF

下载方法：如果您不是飞猫云会员，请在下载页面滚动到最下方，点击“非会员下载”，网页跳转后再次滚动到最下方，点击“非会员下载”。

解压软件：Bandizip