植物单细胞培养技术专家讲座

1植物单细胞培养意义1.1有利于观察细胞个体分裂、分化、生长和繁殖情况；1.2有利于取得纯细胞系；1.3有利于进行细胞特征、细胞生长规律、细胞代谢过程及其调整控制规律等方面研究；1.4有利于生物转化和天然化合物生产。植物单细胞培养技术专家讲座第1页

2植物单细胞分离技术2.1从外植体直接分离单细胞2.2从愈伤组织分离单细胞2.3经过原生质体再生法取得单细胞

植物单细胞培养技术专家讲座第2页

2.1从外植体直接分离单细胞外植体经过切割、捣碎或酶解，然后经过一定孔径不锈钢筛网过滤，得到细胞悬浮液。悬浮液中所含完整细胞数量较少，但分散性好。植物单细胞培养技术专家讲座第3页

2.2从愈伤组织分离单细胞将愈伤组织进行振荡培养，使其分散成小细胞团或单细胞，然后用适当孔径不锈钢筛网过滤，除去大细胞团和残渣，离心除去小残渣，得到单细胞悬浮液。为了增强分散效果，必要时可添加适量果胶酶，使由果胶粘连在一起细胞分开。植物单细胞培养技术专家讲座第4页

2.3经过原生质体再生法取得单细胞外植体、愈伤组织或细胞团经过纤维素酶和果胶酶等作用，除去细胞壁而取得原生质体。原生质体再生细胞壁外植体愈伤组织单细胞悬浮液愈伤组织再生植株酶解植物单细胞培养技术专家讲座第5页

3植物单细胞培养方法3.1平板培养法（1960年，Bergman）3.2看护培养法（1954年，Muir）3.3微室培养法（1960年，Jones）植物单细胞培养技术专家讲座第6页

1单细胞悬浮液制备2单细胞悬浮液密度调整3固体培养基配制4单细胞悬浮液与固体培养基等量混合5暗培养6继代培养3.1平板培养法程序：植物单细胞培养技术专家讲座第7页

1单细胞悬浮液制备单细胞起源：3.1平板培养法程序：外植体(叶肉细胞)愈伤组织原生质体植物单细胞培养技术专家讲座第8页

2单细胞悬浮液密度调整要求：调整后密度为植板细胞密度2倍调整方法：①假如密度过大，加入液体培养基进行稀释；②假如密度小，经过低速离心使细胞沉降后，再加入适量液体培养基。3.1平板培养法程序：植物单细胞培养技术专家讲座第9页

3固体培养基配制当细胞植板密度过高(104或105个/ml)，使用和在悬浮培养中或愈伤组织培养中成份相同纯合成培养基当细胞植板密度过小，细胞对培养基要求就变得越加复杂注意：要选择适合单细胞培养培养基3.1平板培养法程序：植物单细胞培养技术专家讲座第10页

4单细胞悬浮液与固体培养基等量混合①当培养基凝固后，细胞能均匀分布并固定在很薄一层(1mm)培养基中②在培养皿外对单细胞做标识，便于观察。3.1平板培养法程序：植物单细胞培养技术专家讲座第11页

5暗培养注意：培养期间对细胞频繁镜检会对细胞生长产生有害作用，应尽可能降低镜检次数。3.1平板培养法程序：植物单细胞培养技术专家讲座第12页

6继代培养选取生长良好由单细胞形成细胞团，能够取得由单细胞形成细胞系。3.1平板培养法程序：植物单细胞培养技术专家讲座第13页

初始植板细胞浓度对单细胞培养影响用平板法培养单细胞或原生质体时，常以植板效率来表示。植板效率=每个平板上形成细胞团数/每个平板上接种细胞总数×100%假如在琼脂培养基或液体培养基中，植板细胞初始密度为1×104或1×105个/ml，植板后由相邻细胞形成细胞群落常混在一起。假如降低植板密度或完全孤立地培养单细胞，则可防止这个问题。不过当低于临界密度时，细胞就不能分裂。原因是什么？？植物单细胞培养技术专家讲座第14页

初始植板细胞浓度对单细胞培养影响原因：植物细胞生长繁殖需要一定浓度一些内源化合物。植物单细胞培养技术专家讲座第15页

初始植板细胞浓度对单细胞培养影响怎样培养完全孤立单细胞？？植物单细胞培养技术专家讲座第16页

将生长活跃愈伤组织接种在固体培养基上3.2看护培养法程序：2在愈伤组织块上方放置一片面积为1cm2无菌滤纸，滤纸下方紧贴愈伤组织植物单细胞培养技术专家讲座第17页

3借助于微型移液管从细胞悬浮液中提取适量单细胞悬

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